精准医疗是未来医疗的方向,而医疗的起点是诊断,只有精确的诊断才可能谈得上精确治疗。随着分子检测技术的发展,越来越多的病原体检测都可实现精准诊断。分子检测技术以DNA和RNA检测技术为主要代表,由于RNA仅在活的病原体中存在,故以RNA为靶标的诊断技术可以反应病原体的存活状态,可以用于疗效监测,指导临床精准用药,达到精准医疗的目的。目前实现RNA检测的主要有三种技术,分别为TMA,NASBA和SAT技术,杭州三院泌尿科现已走在时代前沿,开展SAT检测,精准无创的检测泌尿系相关感染,并已积累上万名病例。

DNA检测技术

主要包括了聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和连接酶链反应(linkchainreaction,LCR)。PCR电泳因其检测结果存在假阳性而导致特异性下降;而荧光定量PCR杂交法、PCR微孔板杂交法及套式PCR等方法,较好地解决了敏感性和特异性问题。LCR法可解决PCR中存在的假阳性问题,敏感性也有所提高,是一种较好的检测方法。

基于DNA的体外扩增其模板既可以来自于活菌也可来自死菌,因此不能作为非病毒病原体的活菌诊断,即使病人得到了有效的治疗,病原体死亡DNA仍然能够稳定存在至少3周时间,检验结果无法及时反应治愈结果,不利于临床获取有价值的诊断信息,从而导致错误治疗和抗生素过度使用.并且DNA稳定而不容易降解的特性,也较易在实验过程中产生污染。

RNA检测技术

RNA为单链结构,容易降解,在死菌中不易被检测到同时也不易造成污染。最早由美国Gen-Probe公司开发的TMA技术是逆转录酶介导的体外特异性扩增rRNA直接进行检测的一项新的RNA检测技术。rRNA即核糖体RNA,是细菌核糖体的主要成分,在每个原核生物中存在约-个拷贝。

国内自主研发的RNA检测技术称为RNA实时荧光恒温扩增检测技术(SimultaneousAmplificationandTesting),简称SAT技术。

基本原理如下:

1.SAT技术以rRNA为靶标,在M-MLV反转录酶作用下产生一条cDNA链

2.M-MLV反转录酶的RNaseH酶活性将杂合的RNA/DNA中RNA降解,再经M-MLV反转录酶作用产生一个cDNA拷贝

3.随后T7RNA多聚酶以反转录的DNA为模板扩增产生-0个RNA拷贝

4.每一个RNA拷贝从反转录开始再一次进入扩增循环,同时扩增产生的RNA拷贝与优化的探针特异结合产生荧光信号

5.由荧光检测仪捕获荧光信号进行分析。

SAT技术的特点:搜索

1)快速

SAT技术在恒温42℃经40-60钟即可获得理想的实验结果。

2)准确

特异性提取、特异性引物以及特异性探针保证了检测结果的高特异性和准确性。

3)低污染

由于扩增产物为RNA,减少了PCR过程中对实验仪器和环境造成的污染,避免了交叉污染及假阳性。

4)抗抑制

为了减少样本的抑制反应,SAT对于样本的制备采用磁珠吸附法,特异性捕获靶标确保了高特异性的提取,通过水相洗涤最大程度地去除各种杂质,进而避免了假阴性结果的出现。

5)高灵敏

SAT扩增效率极高,30min即可获得倍的扩增,再通过实时检测,整个过程仅需要2.5h,提高了检测的灵敏度。

6)无创尿检

该技术可以检测包括尿液在内的各种样本,且大量临床数据表明,SAT技术检测不同部位的样本结果一致性很好。

7)辅助判愈

由于RNA只存在于活的细菌中,所以RNA检测结果可以用于疗效判断,符合目前精准医疗的要求。

作为一项成熟的检测技术,SAT目前已成功地应用于沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲脲原体、生殖支原体等多种临床检测。通过可靠,准确的RNA扩增检测技术,必将给您提供有力的临床诊断依据。目前杭州三院泌尿外科已开展相关检测,欢迎各位前来咨询、检测。

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