犬的细菌性支气管炎/肺炎是非常常见的疾病，尤其常见于幼年犬。随着国内小动物医学的发展和抗生素的广泛应用，犬呼吸道感染细菌的耐药性日趋严重，为了解北京地区犬呼吸道感染病原菌的耐药性，我们对前来中国医院的呼吸道感染患犬进行气管灌洗，对灌洗液进行微生物培养和药敏试验，初步调查犬呼吸道源性细菌的耐药情况，为临床工作提供参考。

1.1病例来源年1月至年5月期间来医院就诊的病例。进行气管灌洗的患犬均有严重的持续性呼吸道症状，X线检查提示严重肺炎；至少用过两种抗生素。记录患犬的年龄、品种、性别、临床表现、用药史等信息。

1.2气管灌洗（气管内技术）采用丙泊酚麻醉（3~5mg/kg，IV），无菌操作，插入气管插管，经气管插管插入冲洗管（无菌导尿管）；冲洗时注入少量生理盐水，然后迅速回抽。

1.3细胞学检查取少量气管冲洗液制作细胞学涂片（每个病例至少4张玻片），分别采用商品化瑞姬氏染液和革兰氏染液染色。

1.4微生物培养和药敏试验将采集到的新鲜样本迅速接种于血平板、麦康凯平板和SDA平板，24小时、48小时和72小时各查看一次结果，根据菌落大小选择合适的时间进行药敏试验（药敏试验平板选择原则：普通细菌采用MHA平板，苛养菌采用血平板）。

1.5数据统计分析白细胞计数采用描述统计，以平均值标±标准差的形式显示。

2.1年龄分布

14例患犬中，2例为成年犬（2岁），其他均为幼龄犬（2月龄至8月龄）（见表1）。

表例细菌性呼吸道感染患犬的年龄分布

2.2临床表现

所有患犬均表现为较为严重的呼吸道症状，持续性咳嗽、脓性鼻分泌物、气喘、腹式呼吸甚至呼吸困难；同时伴有食欲下降、精神不振等症状，还有2例有发烧的表现。

2.3实验室检查结果

2.3.1全血细胞计数（CBC）

所有患犬均进行了全血细胞计数（CBC），患病初期白细胞水平处于参考范围内（[14.87±2.97]×/L，n=14），随着病情发展，白细胞显著升高，最高点白细胞达（[29.04±10.13]×/L，n=9），康复患犬的WBC最终回到参考范围内（[12.56±1.93]×/L，n=7）。

2.3.2细胞学检查

所有气管灌洗液（图1）均进行了细胞学检查，所有病例细胞学检查均可见大量嗜中性粒细胞（图2），仅有3例病例的气管灌洗液中可见到大量细菌（图3），2例病例的冲洗液中可见到少量纤毛上皮。

2.3.3微生物检查

14例患犬的气管灌洗液经培养后，仅有1例阴性其他13例（92.9%）均为阳性，其中一例合并酵母菌感染和细菌感染。50%（7例）的患犬仅培养出一种细菌，35.7%的患犬培养出两种细菌，还有14.3%的患犬培养出3种细菌（见图4和图5）。

药敏试验结果显示，革兰氏阴性菌的耐药性非常强，从%（克林霉素）到18.7%不等，4株细菌同时做了美罗培南和亚胺培南，均对两种药物敏感（详见表2）；多重耐药的现象也非常严重，3株细菌仅对美罗培南、亚胺培南敏感；1株细菌仅对美罗培南、亚胺培南和氯霉素敏感。由于菌株数量较少，未进行菌种鉴定和耐药谱分析。

表株革兰氏阴性细菌药敏试验结果

注：ACA代表阿莫西林克拉维酸；LVF代表左氧氟沙星。

2.4影像学检查结果

胸部X线平片检查显示，14例患犬均有严重的肺炎征象（见图6和图7）。50%以上的病例呈肺泡型，21.4%的病例表现为大叶性肺炎。

2.5治疗方案及治疗效果

进行气管灌洗的患犬根据药敏试验结果选择合适的抗生素治疗，并辅以营养支持。14例患犬中，7例（50%）康复，4例（28.6%）死亡，3例跟踪失败。

分离菌株仅对美罗培南和亚胺培南敏感的3例患犬中，1例康复，1例自然死亡，1例治疗过程中发展为腹水，最终被安乐；康复的病例中，多数在更换抗生素后三天左右症状好转，连续用药一周左右症状消失。

呼吸道感染的致病原有很多种，包括细菌、真菌、病毒和寄生虫等[1-3]。病毒一般不直接引起严重的肺炎，继发细菌感染后才会表现出明显的临床症状[2-4]。感染性肺炎常见于免疫不全或有免疫抑制的幼年动物[4,5]，因此，犬瘟诱发的肺炎在国内非常常见。一项调查显示，犬的急性呼吸道感染病例中，37.8%的患犬副流感病毒阳性[4]。因此，在犬的细菌性呼吸道感染的诊断中，病因调查非常重要，但需要更多的实验室检查（尤其是分子生物学检查）诊断。本次调查中，85.7%的患犬为幼龄犬，未免疫完全，一例2月龄边境牧羊犬经PCR检查和其他检查诊断为犬瘟热，后继发为严重的细菌性肺炎。其他病例CDV抗原检查均为阴性，但未进行其他呼吸道病毒（如流感病毒、副流感病毒和腺病毒Ⅱ型）的抗原检查，无法确细菌感染是否为继发的，诊断水平急需进一步提高。

细菌性肺炎患犬的白细胞可能会明显升高，且有可能出现核左移[6]。本次调查发现，14例患犬在严重肺炎期间，出现了以嗜中性粒细胞和单核细胞升高为特征的白细胞增多症。气管灌洗培养进一步佐证了感染引起了局部严重的化脓性炎症，组织吞噬需求增多，最终导致外周血单核细胞增多。2例患犬白细胞升高伴显著核左移，可能是由于肺部炎症消耗过多白细胞，超过骨髓生成速度导致的。

气管灌洗是一项重要的实验室检查技术，可以避免口腔或鼻腔正常菌群的污染，获得较为准确的数据[3]。这一操作要求较高，需在已经获得病史、体格检查、胸部X线片及其他常规指标后进行。本次调查的患犬均进行了较为全面的检查，做了全面的麻前评估，最后采取气管内技术进行气管灌洗，冲洗液迅速送至检验科进行细胞学检查和微生物培养。

气管灌洗液检查中，细胞学检查非常重要，可以从细胞的种类和数量鉴别化脓性炎症、肉芽肿性炎症、肿瘤等[7]。本次调查中，所有病例气管灌洗液细胞学检查均可见大量嗜中性粒细胞（80%），且多呈退行性变化，巨噬细胞所占比例不足10%，这些表现提示化脓性炎症反应，不管有无肉眼可见的细菌，均怀疑细菌感染，需进行微生物培养。本次调查中，仅有3例患犬细胞学检查时发现有细菌，阴性检查结果可能跟灌洗液中有大量黏液有关，这些黏液含有蛋白样物质，它们能使细胞成团，干扰细胞形态学的判读。细胞学检查在微生物检查方面也有很多自身的局限性，因此，不能仅靠细胞学评估是否为感染。

本次调查中，13例（92.8%）患犬的气管灌洗液细菌培养阳性。结合细胞学检查结果，再次提示微生物培养是诊断的关键，敏感性远远高于细胞学检查。培养呈阴性的患犬一直在应用抗生素，因此，单次培养并不能排除细菌感染。细菌性肺炎犬、猫中，最常分离出的细菌包括巴斯德菌、克雷伯氏菌、大肠杆菌、假单胞菌、葡萄球菌、链球菌和博德特氏菌等[1,2,4]。文献显示，博德特氏菌是一种球杆菌，常和犬呼吸道感染综合征或窝咳有关[4,5]。本次调查样本量也不够大，研究不够深入，尚未进行细菌种属鉴定，无法了解是否有博德特氏菌感染，以后需深入调查，提高认识水平。

近年来，随着抗生素的广泛应用，宠物源性细菌的耐药性越来越广泛，尤其是革兰氏阴性杆菌[3]。本次调查中，16株分离到的革兰氏阴性杆菌表现出严重的耐药性，多数菌株对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖胺类、四环素类、氟喹诺酮类抗生素均表现出不同程度的耐药性，对碳青霉烯类、β内酰胺酶抑制剂有较高的敏感率，甚至有3株细菌仅对碳青霉烯类敏感。这一结果提示，北京地区犬呼吸道源性细菌的耐药性非常强，这和患犬病程较长、用过多种抗生素一定关系，但环境中的耐药菌也可能是感染的重要来源。

本次调查的病例均根据药敏试验结果更换了合适的抗生素，结果显示50%的病例康复，28.6%的病例死亡，还有22.4%的病例跟踪失败。康复病例多于更换药物3天左右明显好转，一周左右康复，大大缩短了治疗时间；死亡病例直接死于肺炎，或因严重肺炎被安乐。值得注意的是，分离菌株仅对碳青霉烯类敏感的3个病例中，仅有1例康复，另外2例均死亡。

综上所述，对犬呼吸道感染来说，气管灌洗和微生物培养是非常好的诊断手段，微生物培养的敏感性远远高于细胞学检查，药敏试验结果可用于指导临床用药，缩短治疗时间。然而，本次调查还发现北京地区犬呼吸道源性细菌耐药性很强，多重耐药现象已经是常态，临床兽医若不进行气管灌洗和微生物培养，已经无法经验性选择何种抗生素来进行治疗。这一现象分表明，抗生素应用已经成为兽医临床面临的重大挑战，科学合理应用抗生素，已经成为临床兽医的一种职责。

致谢：医院影像科提供了大量影像学诊断的帮助，在此深表感谢。

主要参考文献

[1]EllisJA.HowwelldovaccinesforBordetellabronchisepticaworkindogs?Acriticalreviewoftheliterature-.VetJ,,(1):5-16.

[2]NelsonRW,CoutoCG.Smallanimalinternalmedicine.Fifthedition..

[3]NelsonRW,CoutoCG.Smallanimalinternalmedicine.4thed.St.Louis,Mo.:Mosby/Elsevier,.

[4]SchulzBS,KurzS,WeberK,etal.DetectionofrespiratoryvirusesandBordetellabronchisepticaindogswithacuterespiratorytractinfections.VetJ,,(3):-.

[5]CanineandFelineInfectiousDiseases.3.

[6]DialSM,RosenfeldAJ.Clinicalpathologyfortheveterinaryteam.Ames,Iowa:Wiley-Blackwell,0.

[7]CowellandTylersDiagnosticCytologyandHematologyoftheDogandCat.3.