现代医学的日益发展,广谱抗生素、免疫抑制和抗肿瘤药物、皮质醇激素在临床上的广泛应用,真菌感染特别是条件性致病菌感染的发病率和病死率呈急剧上升的趋势。

1常见深部真菌感染病原学特点

条件致病性真菌主要有念珠菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌、放线菌和奴卡菌等。念珠菌属在以往的院内感染中占主导地位,近年来,国家的99个研究室组的全球监测中心也证明这一点。

1.1念珠菌属念珠菌属又称假丝酵母菌,广泛存在于自然界中,寄生于人类的皮肤和黏膜,属条件致病菌,感染易发生于严重免疫缺陷患者或接受肠道外营养患者的各个部位,以白色念珠菌致病力最强。其次是热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌。但随着预防性药物的应用增多,非白色念珠的感染有上升趋势[2]。

1.2曲霉菌属曲霉菌为丝状真菌,孢子在适宜条件下芽生形成菌丝,许多菌丝交织成菌丝体,可随气流随处飘落,其中有20多种可对人致病,如引起食物中毒、机体变态反应、肺部或其他器官的炎症性、肉芽肿性和坏死性曲霉菌感染。深部曲霉菌感染最易累及肺部,主要致病菌有曲霉菌、土曲霉菌、烟曲霉菌、黑曲霉菌,其中以烟曲霉菌最常见。

1.3隐球菌属经墨汁染色后镜检,细胞为圆形或椭圆形,外围有宽厚的透明荚膜,荚膜可比菌体大1~3倍,厚荚膜具有诊断意义,非致病性隐球菌无厚荚膜[3]。隐球菌在自然界中广泛存在,感染者多为严重免疫缺陷患者,尤其是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者,主要侵犯中枢神经系统,造成脑实质性损害,也可侵袭皮肤、黏膜、淋巴结、骨髓和内脏等。

2常见致病性真菌感染的发病机制

真菌感染后机体的防御反应包括非特异(天然)免疫和特异免疫(获得性)。前者为第一线防御,发生于感染初期,包括中性粒细胞(PMNL)、单核细胞(MNC)、巨噬细胞(M)、自然杀伤细胞(NK)、补体、树突状细胞(DC)、诸多炎症介质和天然抗体等参与;后者是刺激机体免疫系统后发生的以T、B细胞及其介质参与的获得性免疫。二者相辅相成,构成了机体防御真菌感染的免疫系统。

3诊断方法

深部真菌感染临床诊断比较困难,临床表现可因感染部位、临床和体征不具有特异性,不易与细菌感染相区别。实验室诊断主要方法有镜检、培养、血清学诊断、组织病理学检查和分子生物学方法等。

3.1镜检加培养目前真菌实验室检查的基本手段仍然是KOH涂片和培养,取皮损处结痂或组织镜检观察菌丝或孢子,取尿液或脑脊液等离心去上清,镜检,一般20~30min即可完成[6]。培养法1次取材直接涂片漏诊率高达45%,而3次取材直接镜检的累积阳性率可达99%[7]。应用显色培养法经37℃48h观察菌落色泽和形态即可做出鉴定,阳性率88.6%[8]。

3.2G试验几乎各种致病性真菌细胞壁上均有B13D葡聚糖。在真菌入血后,应用MB80微生物快速动态检测系统,无需培养直接定量检测真菌感染患者血浆中B13D葡聚糖,可以作为临床早期难以确诊的深部真菌感染的辅助性诊断方法。

3.3血清学检测常用抗原检测方法有新生隐球菌荚膜抗原乳胶凝集试验,检测念珠菌和曲霉菌抗原的酶联免疫吸附实验(ELISA)等;抗体检测方面有检测念珠菌、曲霉菌和隐球菌的单克隆抗体等。

3.4组织病理学检查组织病理学检查是以深部真菌感染尤为重要。在病变中位活检可用PAS染色使菌丝和孢子表面染成红色,便于观察。免疫组织化学和荧光染色法提高了检查的敏感度和特异性[9]。

3.5分子生物学方法近年来聚合酶链反应(PCR)、DNA探针限制性酶切片段长度多态性分析(RPLP)、DNA指纹图谱、随机扩增DNA多态性(RAPD)等技术广泛应用于该病的诊断和分型研究,与传统方法相比,PCR法敏感度高、特异性强,快捷、方便、重复性好,特别是实时定量PCR技术等方法的开展和应用,能够高通量快速筛选临床标本,达到早期诊断的目的。但是极微量的污染可能导致假阳性的结果是PCR技术成为临床微生物常规检测方法的最大问题。

4治疗和预防

目前,临床抗真菌药物大体分为3代:第一代以灰黄霉素为代表,对皮肤癣菌有较强的抑制作用,但对深部真菌无效;制霉菌素及两性霉素主要用于深部真菌的治疗。第二代为咪唑类,主有酮康唑、克霉唑、咪康唑、益康唑等。第三代为三唑类,包括伊曲康唑、氟康唑;丙烯胺类,包括特比奈芬等。最近又有新的抗真菌药棘白菌素、尼克霉素Z、帕地霉素和醋酸卡泊芬净应用于临床[。由于免疫抑制患者增多和侵袭性真菌致病类型的改变,更须对常规抗真菌药物不断改进。

对一般治疗无效但高度怀疑真菌感染而尚无真菌学确切证据者,可应用抗真菌药物进行适当的诊断性治疗。在真菌污染的环境,应佩带防护口罩,如异物粉尘飞入眼内,切不可用力揉眼,应及时用生理盐水冲洗,以免损伤角膜;在清理家具、食物和杯器等物品时,用湿布擦试,以防霉菌孢子飞扬污染空气。对真菌污空间、物品和场所等,可用甲醛和过氧乙酸溶液喷洒或浸泡,也可用高锰酸钾或福尔马林液混合熏蒸。

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